附子生物碱与甘草活性物质组合抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究

了主要作用并参与肿瘤的形成和转移。应用化学致

癌剂对小鼠结肠诱导建立损伤和炎症模型,当除去

β后,由于κ结肠上皮细胞中特异的κIKIB不能降

κ解而导致NF2B活化受限,最终引起肿瘤发生率下

降。因此,半边旗提取物5F在体外引起非小细胞

κ肺癌细胞凋亡可能是与抑制NF2B活性有关。

参考文献:

[1]　邓亦峰,梁念慈1半边旗中二萜类化合物的超临界CO2萃取

及HPLC2MS分析[J]1中草药,2004,35(2):14521481[2]　张　晓,崔　燎,田中信寿,等1半边旗有效成分及抗肿瘤

活性研究[J]1中国药学杂志,1997,32(1):372381[3]　刘　义,吴科锋,李　立,等1半边旗提取物5F对非小细胞

肺癌NCI2H460细胞生长的抑制作用[J]1肿瘤防治研究,2009,36(1):92121[4]　李　立,吕应年,刘　义,等1半边旗提取物5F诱导

HepG2细胞凋亡与p53活化及血管内皮生长因子抑制有关[J]1中草药,2010,41(2):24122451[5]　LiJH,HeCW,LiangNC,etal.Effectsofantitumor

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κ高转移卵巢癌细胞系HO210PMNF2B(p65)、Smad3蛋

κ白和NF2B(p65)、ETS21mRNA表达的影响[J]1中草药,

2005,36(4):54525481

・439・

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sensitizerstoanticancerdrugs[J]1NatRevCanc,2005,5:29723091

附子生物碱与甘草活性物质组合抗大鼠佐剂性关节炎的实验研究

杨洁红,张宇燕,万海同,朱振洪,李金辉

(浙江中医药大学,浙江杭州　310053)

3

摘　要:目的　观察附子生物碱与甘草活性物质(三萜皂苷和黄酮等)组合对大鼠佐剂性关节炎(AA)模型的抗

炎效应,研究两者配伍的抗炎作用机制,探讨两者配伍的意义。方法　设对照组、模型组、附子组(即附子生物碱组)、附子甘草配伍组(即附子生物碱与甘草活性物质配伍组)、雷公藤组,观察各组大鼠足肿胀程度和关节炎指数(AI)变化;检测大鼠血清和关节浸液内细胞因子如白细胞介素21β(IL21β)、α(TNF2α)及前列腺素肿瘤坏死因子2

β基因表达;观察踝关节组织病理改变。结果　E2(PGE2)水平;用RT2PCR检测踝关节组织IL21与对照组比较,

β、α、AA模型组大鼠关节肿胀严重,AI明显升高,血清和关节浸液内IL2TNF2PGE2水平显著升高,踝关节组织IL2

1基因表达明显增加,并发生明显病理改变;与模型组相比,附子组、附子甘草配伍组大鼠关节肿胀得到改善,AI降

β、α、β基因表达减弱,病理组织改善,且附子甘草低,血清和关节浸液内IL21TNF2PGE2水平降低,踝关节组织IL21

配伍组优于附子组。结论　附子生物碱与甘草活性物质配伍组合能有效抗炎,缓解AA症状,改善AA大鼠免疫功能和组织结构,两者配伍作用优于单用附子生物碱,体现了附子生物碱、甘草活性物质是附子甘草两者配伍抗炎效应的重要物质基础。

关键词:附子生物碱;甘草活性物质;佐剂性关节炎;抗炎;细胞因子中图分类号:R28515　　　文献标识码:A　　　文章编号:025322670(2010)0320439206

①　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　收稿日期:2009206212

基金项目:国家自然科学基金资助项目(30873430,30973933);浙江省自然科学基金资助项目(Y207759);教育部高校博士点基金资助项

目(20093322110001)

),女,广东揭西人,副教授,医学博士,主要从事方剂配伍研究。作者简介:杨洁红(1969—

Tel:(0571)86613711　E2mail:yannoo7376@sina.com

3通讯作者　万海同

・440・

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第41卷第3期2010年3月

Hettich公司;TanonEPS100电泳仪,北京六一仪

　　附子为毛茛科植物乌头Aconitumcarmichaeli

Debx.的子根加工品,具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪等功效,用于亡阳虚脱,肢冷脉微,阳萎,宫冷,心腹冷痛,虚寒吐泻,阴寒水肿,阳虚外感,寒湿痹痛,阴疽疮疡。临床上广泛用于治疗风湿、类风湿、关节炎等症。附子发挥药效的主要成分为其所含的乌头碱等生物碱类物质(主要为二萜类),具有明显的镇痛、抗炎、对免疫功能的影响、对心血管系统的影响等作用。甘草为豆科甘草属植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、光果甘草G.glabraL.或胀果甘草G.inflataBat.的根及根茎,是一

器厂;PCR仪,德国WhatmanBiometra公司;凝胶

成像系统,上海天能科技有限公司。112　药品与试剂:附子生物碱、甘草活性物质(三萜皂苷和黄酮等)自行制备提取,其中附子生物碱部位含生物碱0163%,甘草活性物质中含甘草酸78140%、甘草黄酮17151%。通过预实验,附子生物碱的最低有效剂量为3177mg/kg,甘草活性物质配伍用量为17179mg/kg(以附子甘草原药用量1∶1计算)。雷公藤多苷片,浙江普洛康裕天然药物有限公司,批号070101。临用时均用生理盐水配制成相应的浓度。弗氏完全佐剂,美国Sigma公司

β(IL21β)、α产品;白细胞介素21肿瘤坏死因子2

(TNF2α)、前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒,购自上海晶美生物技术有限公司;Trizol溶液、DEPC、Olig(dt)18、RNaseInhibitor(核酶抑制剂)、反转

β、录酶均为上海泽衡生物技术有限公司产品;IL21

β2actin引物于上海泽衡生物技术有限公司合成,IL2β的扩增片段大小(产物长度)810bp,上游引物1

5′2ATGGCAACTGTTCCTGAACTC23′,下游引物5′2TTAGGAAGACACGGATTCCAT23′;β2actin

种常用的重要中药,主要成分为甘草酸等三萜皂苷

和甘草苷为主的甘草黄酮,能补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛,具有明显的抗肿瘤、抗氧化作用,在胃溃疡、肝损害、病原微生物和抗变态反应等方面都有明显的药理作用[1～4]。

《金匮要略》“:痉湿谒病脉证治第二”“风湿相,

搏,骨节疼烦掣痛,不得屈伸,近之则痛剧,汗出短气,小便不利,恶风不欲去衣,或身微肿者,甘草附子汤主之”。甘草附子汤由甘草、附子、白术和桂枝组成,此系风湿表里阳气俱虚证治。方中各药配伍表里同治祛风除湿,尤其甘草意在缓急止痛,又缓附子燥烈有毒之性。在临床附子也常与甘草配伍,甘草不仅能降低附子毒性,还可以增强附子的药效[5]。

以往多从临床疗效、单味药或方剂层次上进行中药研究,本实验突破以上研究方法,以主要的药效物质基础为切入点,进行附子生物碱与甘草活性物质组合及其与抗炎效应的相关性研究,探讨抗炎效应的物质基础及机制,从而为临床提供科学依据,为中药复方研究提供新的思路与方法。

大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)是研究类风湿性关节炎的重要模型[6]。本实验采用AA大鼠模型,通过观察附子生物碱及其与甘草活性物质(三萜皂苷和黄酮等)配伍后对大鼠关节炎的治疗作用、对相关炎症介质及基因表达的影响,以及病理学的改变,研究附子生物碱与甘草活性物质配伍对类风湿性关节炎的治疗作用,探讨两者配伍抗炎效应的物质基础及机制。1　材料与方法

111　主要仪器:ARA520电子天平,奥豪斯仪器(上海)有限公司;KW65—3A型高频电刀,北京医用电子仪器厂;LEICARM2016切片机、ZMN—7803型组织包埋机、LEICA普通光学显微镜,上海徕卡仪器有限公司;Universal32高速离心机,德国

的扩增片段大小410bp;上游引物5′2GAAATCGTGCGTGACATTAAG23′,下游引物5′2CTAGAAGCATTTGCGGTGCA23′。113　动物:清洁级SD大鼠,雄性,50只,体质量(150±10)g,在室温为22～25℃条件下饲养。实验动物由浙江中医药大学动物中心供应,实验室符合国家动物实验设施屏障系统标准,动物实验条件合格证:SYXK(浙)200320003号。114　AA大鼠模型的建立与给药方法:随机从50只大鼠中选10只作为对照,其余用于模型复制。按照文献方法[7],于大鼠左后足跖皮内注射弗氏完全佐剂011mL致炎,致炎后大鼠随机分为4组,即模型组、附子组(附子生物碱3177mg/kg)、附甘组即附子甘草配伍组(附子生物碱3177mg/kg、甘草活性物质17179mg/kg)、雷公藤组(雷公藤多苷片,9mg/kg)。对照组予以生理盐水注射液同法注射。各组动物于致炎后当天分别ig给药,对照组和模型组给予等容积的生理盐水,每日1次,连续28d。注射佐剂前后不同时期进行病情观察,在致炎后7、14、21、28d计算关节炎指数(arthritisindex,AI)。115　大鼠足肿胀程度测定:在大鼠踝关节处作标

记,根据排水法原理自制测定仪,分别测量造模前和造模后7、14、21、28d大鼠右后足体积2次,取平均

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第41卷第3期2010年3月

值,以致炎前后各组大鼠排水量(mL)差值代表右

后足跖的肿胀度。116　AI的计算[7]:致炎后第7天开始观察并记录全身关节病变程度,每7d记录1次。全身病变按5级评分法评价,根据未注射佐剂的其余3只肢体的病变程度累计积分,计算出AI。0分:无红肿;1分:小趾关节红肿;2分:趾关节和足跖肿胀;3分:踝关节以下的足爪肿胀;4分:包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累计起来,即为每只大鼠的AI。

β、α、117　血清和关节浸液的获取与IL21TNF2PGE2的检测:大鼠致炎给药后28d,用10%水合

氯醛(014mL/100g)ip麻醉,由腹主动脉抽取4～6mL血液,4000r/min,离心10min,取血清,置-80℃冰箱待测;在大鼠非致炎侧踝关节上方015cm处摘取肿胀足爪,纵向切开,放入存有5mL生

・441・

βmRNA在各组大鼠踝关节组织中相对表达量IL21

的变化。119　大鼠关节组织病理切片:处死大鼠后,切取四肢/掌趾部,置于4%多聚甲醛溶液中固定,常规脱钙后,石蜡包埋,切片,片厚约3～5μm,经HE染色后,光镜下观察。1110　统计学处理:各组数据均以x±s表示,采用SPSS1115统计软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析。2　结果211　对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用:模型组于注射

佐剂次日呈明显肿胀,注射部位发红、肿、热、痛;逐日加重达高峰,然后逐渐减轻,于第10天后出现继发性肿胀。其余各组(附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组)大鼠的毛色、活力等状况总体优于模型组。212　对AA大鼠AI的影响:结果见表1。与模型组比较,附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组的关节状况均有明显改善(P<0105、0101),附子甘草配伍组作用优于附子组(P<0105)。213　对AA大鼠足肿胀程度的影响:结果见表2。与模型组比较,附子组、附子甘草配伍组、雷公藤组均能不同程度改善关节炎大鼠足肿胀度(P<0105、0101),且附子甘草配伍组优于附子组(P<0105)。214　对AA大鼠血清和关节浸液内炎症细胞因子

理盐水的试管中4℃浸泡过夜,离心取上清,β、-80℃保存待测。血清、关节浸液中的IL21α、TNF2PGE2的检测采用酶联免疫吸附试验方法(ELISA),按试剂盒说明书操作。

βmRNA表达水平118　大鼠关节滑膜组织中IL21的测定:处死大鼠后,立即取踝关节组织滑膜,投入

液氮中保存,备用。用Trizol法提取总RNA,用逆转录2聚合酶链反应(RT2PCR)方法扩增cDNA,扩增产物经电泳分离后,凝胶成像系统成像,检测

的影响:结果见表3。与对照组比较,模型组大鼠血

表1　附子甘草配伍对AA大鼠AI的影响(x±s,n=10)

Table1　EffectsofcompatibilityofRadixAconitiLateralisPreparataandRadixGlycyrrhizaeonAIinAArats(x±s,n=10)

组　别模型

附子

附子甘草配伍雷公藤

　　与模型组比较:　　3P<0105　3

33

剂量/

(mg・kg-1)-3177

3177+17179

9

P<0105　3

3

AI

7d3110±01742180±01422170±01482160±0152

△

14d6120±01795100±0182

4190±019934110±01883

P<0105

3

21d7130±0162

6150±0178

3

28d7120±01546110±01653

5101±015535130±01673

3△3

6130±01543

5140±01703

3

P<0101;与附子组比较:

△

P<0101vsmodelgroup;P<0105vsaconitigroup

表2　附子甘草配伍对AA大鼠足肿胀的影响(x±s,n=10)

Table2　EffectsofcompatibilityofRadixAconitiLateralisPreparataandRadixGlycyrrhizaeonswellingdegree

ofjointsinAArats(x±s,n=10)

组　别模型

附子

附子甘草配伍雷公藤

　　与模型组比较:　　3P<0105　3

3

剂量/

(mg・kg-1)

-31773177+17179

9

3

造模前体积/

mL1108±01111108±01121107±01101106±0110

3

足肿胀/mL

7d1105±0104

1102±01031101±01031100±01053

△

14d0199±01050194±0107

0193±010930191±01033

3

21d01±0105

0186±0104

3

28d0187±01050184±01063

0180±010230178±01033

△3

0185±01033

0184±01063

P<0105　3

P<0101;与附子组比较:

△

P<0105

P<0101vsmodelgroup;P<0105vsaconitigroup

・442・

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第41卷第3期2010年3月

表3　附子甘草配伍对AA大鼠血清和关节浸液内炎症细胞因子的影响(x±s,n=10)

Table3　EffectsofcompatibilityofRadixAconitiLateralisPreparataandRadixGlycyrrhizaeonlevelsofcytokine

inserumandjointfluidsofAArats(x±s,n=10)

组别对照模型附子雷公藤

　　与对照组比较:

剂量/

(mg・kg-1)

--31779

▲▲

血清各炎症细胞因子/(pg・mL-1)βIL21

67119±10116171176±12115

▲▲3

关节浸液各炎症细胞因子/(pg・mL-1)

PGE2

αTNF2

10198±317037184±3131

▲▲

βIL21

233142±137

▲▲

αTNF2

30191±6132

▲▲

PGE2

25180±7150

▲▲33△△3

8131±214026114±310020172±31113

3△3

3

739142±7615080109±610866127±6172▲▲52182±6138340131±5128334165±61793

33△△3

141163±161563122143±141283106187±171743

29110±3113323159±3109320160±31033

33

603184±671603

3△3

68180±51093

3△△3

附子甘草配伍3177+17179

3△3

14199±2171311166±31263

468156±601953414136±631673

△

56173±61354100±71333

P<0101;与模型组比较:

3

P<0105　3

P<0101;与附子组比较:

△

P<0105

　　▲▲P<0101vscontrolgroup;

P<0105　3

P<0101vsmodelgroup;P<0105vsaconitigroup

β、α、清、关节浸液内IL21TNF2PGE2水平均明显

升高(P<0101);与模型组比较,附子组、附子甘草

β、α、配伍组、雷公藤组IL21TNF2PGE2水平均明

显降低(P<0105、0101),且附子甘草配伍组效果优于附子组(P<0105、0101)。说明附子生物碱与甘草活性部位配伍能显著地降低AA大鼠血清和关节浸液内炎症细胞因子的水平,具有显著的抗炎作用。

βmRNA基215　对AA大鼠关节滑膜组织中IL21因表达的影响:大鼠踝关节组织滑膜经Trizol一步

法抽提总RNA,RT2PCR扩增,电泳分离后成像,用图像分析软件分析凝胶图像以检测显色条带的灰

βmRNA表度值,与内参β2actin之比值即表示IL21达水平。结果见表4,模型组比对照组表达明显增

加(P<0101),附子组、附子甘草配伍组比模型组表达明显减弱(P<0101),且附子甘草配伍组优于附子组(P<0105)。216　对关节组织病理的影响:大鼠四肢/掌趾经固定、脱钙、石蜡包埋、切片后HE染色,光镜下观察发现:对照组关节滑膜细胞结构完整,排列整齐,细胞下为疏松结缔组织,无炎症细胞,关节软骨完整、

光滑、软骨下骨组织清晰;模型组关节滑膜细胞增生严重,滑膜细胞下的结缔组织因胶原纤维增生而变得致密,滑膜内大量淋巴细胞浸润,成纤维细胞增生;附子组、附子甘草配伍组病理得到明显改善,见轻度结缔组织增生,少量淋巴细胞浸润,雷公藤组滑膜表面有1～2层滑膜细胞覆盖,浅层有少量淋巴细胞浸润和胶原纤维增生。见图1。

β表4　附子甘草配伍对AA大鼠踝关节滑膜组织中IL2

mRNA表达的影响(x±s,n=10)

Table4　EffectsofcompatibilityofRadixAconitiLateralis

βPreparataandRadixGlycyrrhizaeonIL21

mRNAexpressioninanklejointstissueofAArats(x±s,n=10)组别对照

模型附子

附子甘草配伍雷公藤

　　与对照组比较:　　与模型组比较:

▲▲33

剂量/(mg・kg-1)

--31773177+17179

9

P<0101

βmRNAIL21

01915±0115111679±01114▲▲11348±01183311005±01161311070±011223

33△3

P<0101;与附子组比较:

33

△

P<0105

　　▲▲P<0101vscontrolgroup;　　△P<0105vsaconitigroup

P<0101vsmodelgroup

图1　附子甘草配伍对AA大鼠关节组织病理的影响

Fig.1　EffectsofcompatibilityofRadixAconitiLateralisPreparataandRadixGlycyrrhizae

onpathologicalchangesofjointtissueofAArats

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　第41卷第3期2010年3月

3　讨论

・443・

　　在祖国医学典籍中,类风湿性关节炎(RA)属

于痹证,相当于“骨痹”“、历节病”。其内因多为气血营卫亏虚,外因则多责之于风寒湿热诸邪,而气候变化、居住环境、以及过劳、体虚则常是重要的诱发因素。现代医学认为,RA是一种以关节滑膜炎症为主要病理表现的慢性、系统性和破坏性的自身免疫性关节疾病。临床表现复杂多样,早期可有红、肿、热、痛和关节功能障碍。晚期关节可出现不同程度的强直和畸形,并有骨腐蚀和骨骼肌的萎缩,严重影响日常生活和工作,是一种致残率较高的疾病,严重危害了人类的身体健康。

RA是一个多基因、多因素参与的病理过程。作为RA的生理标志,各种细胞因子、趋化因子、蛋白酶等受到广泛关注,它们在RA的发病机制研究、早期鉴别诊断、药物治疗机制和药物疗效监测等方面发挥着重要作用。细胞因子网络失调与RA发病及病程进展关系密切,炎症细胞因子如IL21、α及PGE2在RA发病机制和滑膜的保护中起TNF2

到关键作用[8]。RA中的滑膜细胞、淋巴细胞、巨噬

β与TNF2α等细胞处于高度活化状态,可合成IL21

多种炎性细胞因子。释放入关节滑膜液及血液中的

β与TNF2α有许多相似的生物学活细胞因子IL21

性,在RA中主要参与以下病理过程:①激活血管内皮细胞,增强内皮细胞黏附分子的表达,在关节炎时,血液中的白细胞通过与黏附分子相互作用被汇集到关节腔;②刺激结缔组织细胞和多形核细胞产生前列腺素等小分子炎性递质;③通过刺激滑膜细胞和软骨细胞,破坏骨细胞,并产生胶原酶和其他中性蛋白酶,释放骨钙等导致骨和软骨的破坏[9,10]。在RA的病程进展中,滑膜细胞合成释放IL21、TNF等细胞因子,刺激滑膜及炎性细胞产生和释放

滑膜细胞过度增生、增厚,单核巨噬细胞浸润,关节软骨及骨的破坏。

本实验研究表明,与对照组相比,AA模型组大鼠的关节肿胀、疼痛和变形等均较明显,血清和关节

β、α及PGE2水平均显著浸液内细胞因子IL21TNF2β基因明显增强,升高,AA大鼠踝关节组织中IL21

有明显的滑膜细胞增生、增厚,滑膜细胞下结缔组织

增生,淋巴细胞大量浸润,关节面软骨破坏明显,并有局灶性脱落,体现明显的类似于RA的临床症状。

附子生物碱与甘草活性物质组合组炎症关节的肿胀程度能得到有效地缓解,对关节炎性症状有显著改善作用,血清和关节浸液内细胞因子水平显著

β基因表达减弱,病理明显降低,踝关节组织中IL21

改善,滑膜细胞增生减少,偶见少量淋巴细胞浸润,没有明显的关节面软骨破坏或局灶性脱落。且其作用显著优于单用附子生物碱。本实验从改善RA病变局部炎症、调节细胞免疫状态、组织基因表达及病理改变等方面,对附子生物碱与甘草活性物质(三萜皂苷和黄酮等)配伍前后疗效进行比较,研究附子生物碱与甘草活性物质配伍的意义,结果附子生物碱与甘草活性物质配伍对AA具有显著治疗作用,改善各项病理生化指标,且附子生物碱与甘草活性物质配伍后作用优于单用附子生物碱,从组分合和的角度阐述了附子生物碱与甘草活性物质配伍后治疗类风湿关节炎的机制,表明附子生物碱与甘草活性物质是附子与甘草配伍抗炎效应的重要物质基础,充分体现了附子与甘草配伍即中医配伍理论的显著意义,为临床两者的配伍应用提供了可靠的实验依据。同时本实验从研究有效部位的角度出发,探讨中医药配伍的意义和机制,也为中医复方的研究和新药的开发提供了新的思路与方法。

参考文献:

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前列腺素,而PGE2可增加毛细血管通透性,引起炎症反应性水肿、渗出、充血等,并引起软骨下骨质吸收破坏,刺激滑膜血管翳形成,从而加重滑膜炎症及RA的活动性,因此,降低病变组织PGE2的量是药物改善临床症状的重要原因。

RA与淋巴细胞、巨噬细胞、滑膜细胞等功能改变有关。滑膜组织的多种细胞释放各种细胞因子进入滑膜液及血液中,通过介导细胞间的相互作用引起一系列组织损伤酶的释放,促进滑膜细胞、滑膜成纤维细胞的增殖和滑膜微血管的增生,这是导致关节破坏的重要因素,也是导致关节内黏连和后期关节畸变的关键因素[11]。大鼠AA病理学特点包括

・444・

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刺五加叶皂苷B对急性心肌梗死大鼠的保护作用

梁启明,曲绍春,于晓风,徐华丽,韩　冬,睢大筼

(吉林大学药学院药理教研室,吉林长春　130021)

3

摘　要:目的　研究刺五加叶皂苷B(ciwujianosideB)对大鼠急性心肌梗死的影响及其机制。方法　通过结扎大

鼠左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型;观测以下指标:左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、动脉收缩压(SBP)、动脉舒张压(DBP)、平均主动脉压(MAP)、心率(HR)、心肌梗死范围(MIS);肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;游离脂肪酸(FFA)及乳酸(LA)水平;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH2Px)、肿瘤坏死因α(TNF2α)及白细胞介素26(IL26)水平。结果　子2与模型组比较,刺五加叶皂苷B可显著升高急性心肌梗死大鼠LVSP、±dp/dtmax、HR、SBP(P<0105),降低LVEDP(P<0105),对DBP、MAP的增加不显著;刺五加叶皂苷B

α、可明显缩小MIS,降低血清CK、LDH、AST活性及MDA、FFA、LA、TNF2IL26水平(P<0105、0101);提高

SOD、GSH2Px活性(P<0105)。结论　刺五加叶皂苷B对大鼠急性心肌梗死具有明显保护作用,可能与其增强抗氧化酶活性,减少自由基损伤,纠正FFA代谢紊乱及LA堆积,抑制炎症反应等机制有关。关键词:刺五加叶皂苷B;心肌梗死;自由基;炎症中图分类号:R28612　　　文献标识码:A　　　文章编号:025322670(2010)0320444204

　　刺五加叶皂苷系从五加科植物刺五加Acan2thopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms叶中提取分离的含16种活性成分的总皂苷,其中13种为邵春杰等[1,2]发现的化合物,命名为刺五加苷(ciwujianoside)2A1、A2、A3、A4、B、C1、C2、C3、C4、D1、D2、D3和E。其中刺五加叶皂苷B(ciwujiano2sideB)是一种单体成分,分子式为C58H92O25・

α3H2O,相对分子质量为1242,化学名称为32氧22

β吡喃鼠李糖基2(1→2)22吡喃阿拉伯糖基2302去甲α齐墩果212,20(29)2二烯2282酸282氧22吡喃鼠李糖

ββ基2(1→4)22吡喃葡萄糖基2(1→6)22吡喃葡萄糖基酯。前期研究表明刺五加叶皂苷可减少梗死面积及

梗死后心室重构的发生,对心肌缺血有明显的保护作用[3～6]。但具体发挥作用的单体成分还难以确定。已有研究显示刺五加叶皂苷B对心室肌细胞膜ATP敏感性钾通道有开放作用[7],对异丙肾上腺素导致的大鼠急性心肌缺血有保护作用[8]。本实验通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗

①　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　收稿日期:2009206205

死模型,观察刺五加叶皂苷B对急性心肌梗死的保护作用并探讨相关作用机制。

1　材料111　药品与试剂:刺五加叶皂苷B由吉林大学化学院天然药物化学研究室提供,白色粉末,实验时以蒸馏水配制,经过0122μm孔径滤膜滤过除菌后使用;氯化硝基四氮唑蓝(NB2T)购自上海前进试剂厂;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH2Px)、游离脂肪酸(FFA)、乳酸(LA)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;肿

α(TNF2α)、瘤坏死因子2白细胞介素26(IL26)放免药盒购自中国人民总医院东亚免疫技术研究所。112　实验动物:Wistar大鼠,雌雄各半,体质量220～250g,动物合格证号:SCXK2(吉)200320001,由吉林大学实验动物中心提供。2　方法211　模型制备:急性心肌梗死造模方法参照文献方法[9]。具体如下:将大鼠乙醚麻醉,仰位固定,自左

基金项目:吉林省中医管理局科研基金重点课题(98A17)

),女,吉林春市人,博士,主要从事心血管药理学研究。作者简介:梁启明(1981—

Tel:(0431)85619705　E2mail:lqm19810719@yahoo.com.cn

3通讯作者　睢大筼