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实用医药杂志２ｏｏ８年０５月第２５卷第０５期Ｐｒａｅ Ｊ Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ．Ｖ０】２５。２００８—０５ Ｎｏ．０ ・５９５・ 基础研究 “毒鼠强”在鼠体的组织分布 ・论著・ 及二巯基丙磺钠的促排作用 林丹李艳霞王贤亲 （温州医学院分析测试中心，浙江温州 ３２５０３５） 【摘要】目的研究“毒鼠强”在鼠体内的组织分布及二巯基丙磺钠的促排作用。方法建立高效液相 色谱法测定小鼠体内血浆和组织中“毒鼠强”浓度的方法。结果所建立的高效液相色谱法测定小鼠体内 血浆和组织中“毒鼠强”浓度的方法线性良好，回收率高，精密度好。结论 Ｅ１服“毒鼠强”后在体内各组织 均有分布，二巯基丙磺钠没有明显的促排作用。 （关键词］高效液相色谱法 毒鼠强 二巯基丙磺钠 组织分布 促排作用 【中图分类号】Ｒ１３９．３ 【文献标识码ｌ Ａ Ｓｔｕｄｙ ＯＮ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ，ｓ ｂｏｄｙ ｏｆ ｔｅｔｒａｍｌｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｃｃｒｉｔｉｃ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎａ－ＤＭＰＳ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ＨＰＬＣ ＵＮ Ｄａｎ，ＬＩ Ｙａｎ－ｘｉａ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎ－ｑｉｎ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｏＨｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｅｔｒａｍｉｎｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ＇ｓ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｏｂｓ￣．１－ｖｅ ｔｈｅ ｅｃｃｒｉｔｉｃ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎａ—ＤＭＰＳ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｔｒａｍｉｎｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ Ｓ ｂｏｄｙ．Ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ Ｚ０ＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃ ｌ ８（４．６ｍｍｘ ｌ ５０ｍｍ． ５１ｘｍ）ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｉｔｉｒｌｅ—ｗａｔｅｒ（１５：８５，Ｖ：Ｖ），ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２２０ｎｍ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ｌｉｎｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ５－５００ｎｇ／ｍＬ（ｒ＝０．９９９９１．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ．ｓｐｉｋｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｗｅｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ９２＿３２％一９８．２６％． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｅｔｒａｍｉｎｅ ｗａｓ ｄｉｓｔｉｒｂｕｔｅｄ ｉｎ ｅａｃｈ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｒａｔ＇ｓ ｂｏｄｙ ａｆｔｅｒ ｔａｋｉｎｇ ｏｒａｌｌｙ，ｔｈｅ ｅｃｃｒｉｔｉｃ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｎａ—ＤＭＰＳ ｏｎ ｔｈｅ ｔｅｔｒａｍｉｎｅ ｉＳ ｎｏｔ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＨＰＬＣ Ｔｅｔｒａｍｉｎｅ Ｎａ—ＤＭＰＳ Ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｅｃｃｒｉｔｉｃ ｒｏｌｅ 毒鼠强，又名四二四、等，化学名称为四 （ＸＷ２８０Ａ，上海医科大学仪器厂）；电子分析天平 亚甲基二砜四胺（Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｄｉｓｕｌｐｈｏｔｅｔｒａ 【ＡＢ２０４２Ａ；梅特勒一托利多（上海）仪器公司，灵敏度 ｍｉｎｅ，Ｔｅｔｒａｍｉｎｅ），属急性高效杀鼠剂，对人畜有剧 ０．１ｍｇ］；超纯水器（ＵＰＷＳ，杭州永洁达净化科技有限 毒，国家有关部门已严令禁止使用。然而由于多方 公司），双波长紫外分光光度计（ＴＵ一１９０１，北京普析 面原因。毒鼠强的中毒事件时有发生【】１。近几年来对 通用仪器有限公司）。 毒鼠强中毒的解救、中毒机制和解毒药的筛选等进 １．１．２试剂与药品毒鼠强对照品（由温州市司法 行了大量的研究［２１．但是还是缺少各种实验动物的 鉴定中心提供）；乙腈（ＨＰＬＣ级，默克公司）；超纯水 毒代动力学研究和解毒药研究的数据。本文主要对 （自制，Ｍｉｌｌｉ—Ｑ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司生产）；乙酸乙酯（分 毒鼠强进行相关毒代动力学和二巯基丙磺钠促排 析纯，批号：２００５１１２２）。 作用的研究。 二巯基丙磺钠（上海禾丰制药有限公司，批号： １材料与方法 ０３０９０１１）。 １．１材料 １．１．３动物ｓＤ大鼠，体重（２００￣２２）ｇ，雌雄各半， １．１．１仪器Ａｇｉｌｅｎｔｌ １００系列高效液相色谱系统 由温州医学院实验动物中心提供。 （配紫外检测器），色谱柱：ＺＯＲＢＡＸ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ— １．２实验方法 ｃ８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ×５ ｍ；Ａｇｉｌｅｎｔ科技有限公司）；离 １．２．１ ＨＰＬＣ方法的建立①溶液的配制：精密称 心机（０４１２—１，上海手术器械厂）；旋涡混合器 取５０ｍｇ对照品毒鼠强于１００ｍｌ容量瓶中，甲醇定 基金项目：温州市科技计划项目资助（Ｓ２００２Ａ１２０） 容．浓度为５００１ｘｇ／ｍｌ，即为对照品储备液，于冰箱中 维普资讯 http://www.cqvip.com
・５９６・ 实用医药杂志２００８年０５月第２５卷第０５期Ｐｒａｃ Ｊ Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ．Ｖｏｌ ２５．２００８—０５ Ｎｏ．０ 保存，使用时根据需要配制一定浓度；②样品的提 取：称取样品（匀浆）１．００ｇ于２０ｍｌ离心管内，加乙 酸乙酯５ｍｌ，混匀后超声提取１５ｍｉｎ，３ ６００ｘｇ离心 ５ｍｉｎ，移取上层溶液于２０ｍｌ的离心管中，再用５ｍｌ 的乙酸乙酯重复提取１次，合并提取液，Ｎ 气吹干， 毒鼠强的保留时间影响比较大，其中甲醇会加快毒 鼠强的出峰时间，降低甲醇与水的比例可以推迟出 峰时间但都在５ｍｉｎ内出峰，由于大部分杂质在这 段时间出来，干扰到毒鼠强的测定。换用乙腈一水， １．０ｍｌ甲醇定容，过０．４５１ｘｍ滤膜，待测；③色谱条 件：流动相乙腈：水（１５：８５，Ｖ：Ｖ）；流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱 温２５ｃ【＝；紫外检测波长２２０ｎｍ；进样量２０１ｘｌ；运行时 可以有效地控制毒鼠强的出峰，随着水相的比例加 大，保留时间后推，但水相的比例过大会影响到色 谱峰形，拖尾严重，峰形加宽，灵敏度降低，因此本 实验选用乙腈一水（１５：８５，Ｖ：Ｖ），６ｍｉｎ左右出峰，其 与杂质的分离效果及峰形均能满足实验需要。 色谱图（图１）表明杂质对毒鼠强未产生干扰， 间１５ｍｉｎ；峰面积外标法定量；④标准曲线制备：纯 标标准曲线的制备：准确移取上述标准储备液５０１ｘｌ 于１０ｍｌ容量瓶中，甲醇定容，浓度为１０１ｘｇ／ｍｌ，精密 移取此对照品溶液加甲醇稀释成系列标准溶液，使 之成为５、１０、５０、１００、５００ｎｇ／ｍｌ的毒鼠强溶液，以毒 鼠强浓度（ｘ）和峰面积（Ｙ）进行线性回归；巾ｌ浆标准 曲线：取７支１０ｍｌ具塞试管，依次加人不同浓度不 同体积的酚妥拉明标准工作溶液，再加人空白血浆 １．５ｍｌ，配成浓度相当于５．０、１０．０、５０．０、１００．０、５００ｎｇ／ ｍｌ的血浆样品，再按样品提取方法处理后，以毒鼠 强浓度（ｘ）和峰面积（Ｙ）进行线性回归；各组织标准 曲线：取７支ｌ０ｍｌ具塞试管，依次加人不同浓度不 同体积的酚妥拉明标准工作溶液，再加人肝、肾、 脑、心等组织的匀浆液１．５ｍｌ，配成浓度相当于５．０、 １０．０、５０．０、１００．０、５００ｎｇ／ｍｌ的血浆样品，再按样品提 取方法处理后，以毒鼠强浓度（ｘ）和峰面积（Ｙ）进行 线性回归：⑤组织分布研究：分别在口服剂量为 ０．５ｍｇ／ｋｇ的毒鼠强溶液后的０，５、１、２、８、２４、４８、 １４８ｈ测定血液、肝、脑、心、肾、胃组织的毒鼠强浓 度；⑥促排作用研究：腹腔注射剂量为２００ｍｇ／ｋｇ 二巯基丙磺钠，０．５ｈ后口服剂量为０．５ｍｇ／ｋｇ毒鼠强 溶液，然后在口服毒鼠强后的１、２、８、２４、４８、１４８ｈ 测定血液、肝、脑、心、肾组织的毒鼠强浓度，观察二 巯基丙磺钠的影响。 ２结果 － ２．１ ＨＰＬＣ方法验证 ２．１．１标准曲线ｍ浆标准曲线：Ｙ＝３２４８５．５Ｘ一 １１．８９，相关系数为ｒ＝０．９９９ ９。组织标准曲线见表１。 表１毒鼠强在血浆和不同组织中的标准曲线方程 ２．１．２ 内源性物质干扰在相同条件下毒鼠强在 长柱２５０ｍｍ和短柱１５０ｍｍ上的保留时间变化不 大，且在Ｃ１８柱上与杂质未完全分离，容易导致假 阳性现象，因此本实验选择ＸＤＢ—Ｃ８（４．６ｍｍｘ １５０ｍｍｘ５１ｘｍ），得出较满意的分离效果。流动相对 证明该方法可以作为生物检材样品的分析检测。 ｛ Ｉｉ 、 … 一 ｌ．一一一… （ａ）毒鼠强标准品（５０ｎｇ／ｍ１），（ｂ）空白，（ｃ）血浆 （ｄ）添加５０ｍｇ／ｋｇ水平毒鼠强的血浆。 图ｌ色谱图 ２．１．３检测限以３倍信噪比为基准，经实际加标 测得毒鼠强在生物样品中定量检出限为０．５Ｉｘｇ／ｇ。 ２．１．４精密度试验和回收率试验于１．０ｇ的空白 血样中加人不同水平毒鼠强标准溶液，按选定的方 法进行处理检测。对高、中、低三个水平进行加标回 收实验，每个水平平行实验６次，以测得的毒鼠强 浓度计算方法相对回收率。结果如表２所示，选定 方法的平均回收率为９４．４８％～９６．５９％。不同组织的 处理方法同上，其回收率和相对标准偏差均在正常 范围内。 表２血浆中毒鼠强的相对回收率试验结果 ：６） ２．１．５稳定性试验取上述对照品溶液浓度为 ５０ｎｇ／ｍｌ，每隔２４ｈ按上述色谱条件测定峰面ｑ积． 结果表明在１４８ｈ内基本稳定，相对标准偏差（ＲＳＤ） ＝１．０３％（ｎ＝７）。 ２．２组织内分布及药代动力学参数使用ＤＡＳ２．０ 维普资讯 http://www.cqvip.com 实用医药杂志２００８年０５月第２５卷第０５期Ｐｒａｃ Ｊ Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ．Ｖ０１ ２５．２００８—０５ Ｎ０．０ 药物代谢动力学软件进行数据处理，得出消除速率 胱甘肽可作为还原剂、氧自由基清除剂。亦可作神 经递质参与受体调节。巯基化合物可作为重金属络 合剂和抗氧化剂在机体中发挥作用。已在临床上广 泛地应用于重金属和类金属中毒的解救。许多报道 证明巯基化合物对非金属类毒物中毒也表现出有 效的解毒作用［６１。例如有报道ＤＭＰＳ已成功地用作 我国常见的沙蚕毒系农药急性中毒的解毒药，取得 良好的解毒效果［７１。 常数１．１ｘｌＯ－３／ｈ，排泄相半衰期６３．８２ｈ，曲线下面积 ７６７．８１３１￣ｇ／Ｌ・ｈ。清除率１０．８７６ｍｌ／ｋｇ・ｈ。峰值浓度 ９．３４５ｔｘｇ／Ｌ，高峰时间０．５ｈ。 ２．３促排作用使用ＤＡＳ２．０药物代谢动力学软件 进行数据处理。得出消除速率常数１．６ｘ１０－３／ｈ，排泄 相半衰期４２．４９ｈ。曲线下面积６００．７９４ｐ，ｇ／Ｌ・ｈ，清除 率清除率１５．５２３ｍｌ／ｋｇ・ｈ，峰值浓度９．８７３１￣ｇ／Ｌ，高峰 时间Ｏ．５ｈ。 ３讨论 本文结果表明：毒鼠强从体内的排泄非常缓 慢，半衰期达６０ｈ多。如果以７个半衰期排泄完毕， 有关毒鼠强毒代动力学的研究不多。仅见于张 体内消除要１个月左右。而且在体内的分布非常均 宏顺等在兔体内的研究刚。有研究结果表明，毒鼠 匀，几乎所有的重要脏器都有分布。这也能说明为 强化学性质的稳定性很高。放置数月，甚至数年后 什么毒鼠强中毒后会引起多功能衰竭。 仍保持生物活性。迄今未见毒鼠强在体内生物转化 在腹腔注射ＤＭＰＳ—Ｎａ后。虽然能缩短半衰期。 的报道。动物实验结果表明。毒鼠强不能透过完整 但并无显著性差异。因此可以得出结论，ＤＭＰＳ不能 皮肤。但可从家兔胸、腹和大腿内侧脱毛区吸收。麻 通过促进毒鼠强在动物体内的分布和排泄来起到 醉犬的食管、咽、气管和喉、口腔黏膜也能吸收。人 解毒作用。 也是如此，有报道毒鼠强可通过口腔和咽部黏膜吸 参考文献 收。毒鼠强在体内以原型存在，并通过血脑屏障进 １ 陈志康．毒鼠强的毒理学和二巯基丙磺钠的特效解毒效应．药 入中枢神经系统显示毒性作用。 物流行病学杂志，２００１，１０（２）：６３． 毒鼠强是神经毒性高效杀鼠药。有强烈的中枢 ２张春颖，朱桐君，陈醒言，等．四次甲基二砜四胺的至惊作用及 机制探讨．卫生毒理学杂志，２００１，ｌ５（１）：５． 兴奋作用，如向后跳跃、头尾昂起，可产生阵挛性及 ３张宏顺，周静，张寿林，等．毒鼠强在家兔体内的代谢动力学 强直性惊厥．中毒动物因强直性惊厥至呼吸衰竭而 研究．中华预防医学杂志，２００５，３９（２）：９１． 死亡。Ｒｏｂｅｒｔｓ等【 用离体神经节进行实验。证明毒鼠 ４张宏顺，周静，张寿林，等．二巯基丙磺钠对毒鼠强在家兔体 强本身不能改变神经元细胞的膜传导．但能降低 内排泄的影响．中国工业医学杂志，２００４，１７（５）：２７７． ＧＡＢＡ引起的膜传导。毒鼠强不作用于外周神经、 ５ Ｒｏｂｅａ Ｃ，Ｖｉｃｔｏｒｉａ Ｊ，Ｊａｍｅｓ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｖｅｎ ｃｏｎ－ ｖｕｌｓａｎｔｓ ａｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＧＡＢＡ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｌｉｍｕｌｕｓ ｎｅｕｒ— 骨骼肌和神经肌肉接头．故认为它的惊厥产生部位 ｏｎｓ．Ｃｏｍｐ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９８１，７０Ｃ（ｐｐ）；９１． 可能主要在脑干。虽说做了大量的研究，但毒鼠强 ６陈志康，沙蚕毒系农药的毒理学和巯基化合物对急性中毒的特 的致惊机制至今仍不是很清楚。 效解毒．药物流行病学杂志，１９９６，５（１）：２０． 体内的巯基是蛋白质和酶保持正常结构和功 ７应斌宇，樊新，张素勤，等．二巯基丙磺钠解救急性四次甲基 能的重要活性基团。参与机体多种功能调节。如谷 二砜四胺中毒的疗效观察．中华内科杂志，２００５，３９（１ １）：７６７． 【收稿日期：２００８—０３—２７１ 【本文编辑：韩仲琪王庆法１ 卡络磺钠加入到ｌＯＯｍｌ生理盐水中于术前２０～４０ｍｉｎ静脉滴 个案与短篇 注。结果，卡络碘钠治疗组总出血量及抽出液中红细胞比容 与对照组分别为１４３．３３±４．３１ ｖｓ １５７．２６￣５．１ １及８２．３４±４．２３ 卡络磺钠用于脂肪抽吸术止血１ ５例 ｖｓ ７９．２５￣４．１６．经ｔ检验显示两组比较差异显著（ ０．０５）。 王 勇①唐胜建①王少华② 卡络磺钠为卡巴克络（安络血）的衍生物，是新一代血管 （ 坊医学院整形外科医院，山东潍坊２６１０４２； 止血药。其主要的止血机理是：①增加毛细血管弹性，降低通 ‘磷坊市人民医院美容整形科，山东潍坊２６１４０１） ． 透性．增加其收缩力；②促进凝血酶的活性和纤维蛋白原的 溶解．进而使出血的部位形成血栓而达到止血的目的。卡络 【中图分类号】Ｒ６２２．９ 【文献标识码】Ｂ 磺钠具有不良反应少，用药安全，起效迅速，作用持久等优 点。此外．在疗效观察过程中还曾发现部分患者使用安络血、 ２００６—１ １～２００７—１ １笔者对３ １例腹部脂肪堆积患者采用 对羧基苄胺、止血敏、维生素Ｋ或６一氨基己酸等止血药无效 行腹部脂肪抽吸术，均为女性。年龄３２～４９岁。患者均无血液 时，改用卡络磺钠后有明显疗效。笔者通过对比证实，卡络磺 系统疾病及肝肾功能障碍。３１例随机分为卡络磺钠治疗组 钠治疗组每ｌｍｌ抽出液中红细胞的个数明显少于对照组（Ｐ＜ １５例，对照组１６例。两组患者术前２０～３０ｍｉｎ均常规给予 ０．０５），治疗组术中出血总量亦明显少于对照组（Ｐ＜０．０５）。表 １０ｒａｇ盐酸哌替啶肌肉注射，且肿胀麻醉液的配制相同（每 明卡络磺钠在脂肪抽吸术中具有良好的止血作用，可以考虑 ５００ｍｌ生理盐水中加入２％￣１Ｊ多卡因１０ｍｌ，肾上腺素０．５ｍｇ， 作为脂肪抽吸术的常规用药。 ５％碳酸氢钠５ｍ１）。在此基础上，卡络磺钠治疗组给予４０ｒａｇ ｆ收稿日期：２００７—１２—１６１ 【本文编辑：李青１