不同配方EM菌对规模化养殖刺参生长和存活的影响

摘要 选取刺参养殖池进行为期 60 d 的摄食生长试验，探讨不同配方 EM 菌对刺参生长和存活的影响。研究结果表明：不同微生态制

剂对刺参的日增重有明显的影响，添加 EM 菌处理组日增重与对照组差异均显著（P<0.05），日增重比对照组增加了 13.21%~82.08%，

其成活率均较高。综合来看，养殖水体中添加不同的微生态制剂对刺参生长有一定的促进作用，尤其是在添加量适宜的情况下，对刺参的 促生长作用尤为明显。

关键词 刺参；EM 菌；生长；存活；影响

刺参（Stichopusjaponicus）属棘皮动物门（Echinodemata）、 海参纲（Holothuroidea）、楯手 目 （Aspidochirotidae）、刺 参 科 （Stichopodidae）、仿刺参属 （Apostichopus），是我国记载的 21 种食用海参中唯一分布于黄渤海的温带种类，为“海产八 珍”之一 [1]

。目前，投放微生态制剂作为一种新兴的改良养殖

水质的手段，在水产养殖中的应用越来越多，作用也受到一 致认可。微生态制剂是从自然环境中筛选出来的微生物菌 体，经培养繁殖后制成的含有大量有益菌的活菌制剂，它不 含任何污染物和化学有害物，对改善水质、提高成活率和相 对增长率、降低发病率、提高水产品品质有一定的促进作 用 [2-4]

。本研究为探索乳酸杆菌、海洋红酵母、芽孢杆菌、光合 细菌在大规模刺参养殖水体的应用效果，进行了几种微生 态制剂对刺参养殖水体水质作用效果的试验，探讨微生态 制剂对刺参生长和存活的影响。 1 材料与方法 1.1 试验材料

试验用刺参全部来自辽宁省营口海参育苗厂。供试菌

种为光合细菌、乳酸菌、芽孢杆菌、海洋红酵母，4 种菌均购 自辽宁省大连市化工研究院，其中光合细菌和海洋红酵母 的活菌浓度均为 6×10 10

cfu/mL，枯草芽孢杆菌和乳酸菌的活 菌浓度均为 3×10 10

cfu/mL。刺参饵料由大连海洋大学科研基 地生产。 1.2 试验设计

试验共设 6 个处理组，其中 1

#

组添加光合细菌 10 mg/kg， 2 #

组添加乳酸菌 10 mg/kg，3 #

组添加芽孢杆菌 10 mg/kg，4 #

组添加海洋红酵母 10 mg/kg，5 #

组添加光合细菌 4 mg/kg、乳

酸菌 1 mg/kg、芽孢杆菌 4 mg/kg、海洋红酵母 1 mg/kg，对照 组不投任何菌种。每组设 3 个平行，共计 18 个养殖池。每 个养殖池规格为5m×3m×2 m，每池水体积约为 25m 3 。

1.3 试验实施

每天投喂 2 次，投饵量为刺参体重的 1.5%~2.0%。试验 期间，养殖池连续充氧，溶解氧为 7.8~8.3 mg/L，pH 值为

7.8~8.3，水温为 12~15 ℃，盐度为 32.5~33.5。试验初期记录 刺参的初始体长和体重，每 7 d 按各组相应的微生态制剂 添加量加入各菌，每隔 20 d 测刺参体长和体重（抽样测定 50 头/组）。

1.4 数据处理与统计

试验过程中的特定生长率（Specific Growth Rate，SGR） 用以下公式计算： SGR（%）＝100×（lnW 2 －lnW 1 ）/t 式中，W 1

为试验开始时刺参体重（g）；W 2

为试验结束时 刺参体重（g）；t 为试验时间（d）。

数据整理和图表制做使用 Exce1 2007 软件。试验结果 使 用 SPSS 17.0 统计软件进行方差分析。试验数据用邓肯 （Duncan′s）法进行显著性比较 。每组数据用平均值±标准差 表示。

2 结果与分析

2.1 不同配方 EM 菌对刺参生长的影响

在水中添加不同微生态制剂对刺参生长的影响见表 1。

从表 1 可以看出，CK 平均日增重最低，为 0.010 6 g，试验 5 #

组最高，为 0.0193g，试验 1 #

组与试验 2 #

组相同，均为 0.0127g， 试验 3 #

组为 0.018 3 g，试验 4 #

组为 0.012 0 g。经过单因素方

差分析和顿肯多重差距检验法作多重比较，结果显示，不同 微生态制剂对刺参的日增重有明显的影响，试验 3 #

组和试 验 5 #

组与 CK 差异极显著（P<0.01），试验 1 #

组、试验 2 # 组、 试验 4 #

组与 CK 差异均显著（P<0.05）。试验 1 #

组、试验 2 #

组、试验 3 #

组、试验 4 #

组、试验 5 #

组的日增重分别比 CK 增

加了 19.81%、19.81%、72.%、13.21%、82.08%。由此可以看 出，试验 5 #

组的日增重相对于 CK 最高。

2.2 不同配方 EM 菌对刺参存活率的影响

在水中添加不同微生态制剂对刺参存活率的影响见图

1。从图 1 可以看出 ，各组刺参存活率均较高 ，但相比之下 ， 试验 5

#

组成活率最高。 3 结论与讨论

养殖水质的好坏直接影响到养殖生物的生命活动。本 研究中所用的微生态制剂为养殖水环境的改良剂，其主要 作用是通过改善水质影响养殖生物的存活和生长。研究结 果表明，该微生态制剂对促进幼刺参生长和提高其存活率 方面都有显著的效果，由于添加的微生态制剂中培养基含 氮物质较多，复合微生态制剂的作用效果会受到一定程度 的影响。光合细菌、海洋红酵母等益生菌营养价值高，富含 蛋白质、维生素及生物活性物质，芽孢杆菌、EM 菌还可以提 （下转第 293 页）

基金项目 大连市基金项目（2011J21DW011）。

作者简介 郝佳(1981-)，男，辽宁锦州人，在读硕士。研究方向：微生态 制剂。 * 通讯作者

收稿日期 2013-04-24

290图 1 各处理组刺参的存活率 1 # 2 # 3 # 4 # 5 # CK 80 85 90 95 100 存 活 率 ∥ % 组别

高消化酶活性，增强机体对养分的消化吸收；另一方面，微 生态制剂降低了水体中氨态氮、亚盐氮等有害物质的 含量，为幼刺参生长提供了良好环境，从而促进刺参快速生 长。华雪铭等

[5]

在饲料照添加 0.2%的芽孢杆菌能显著促进 异育银鲫的生长；于向阳等 [6]

研究表明 EM 菌能净化水质，

分解海参粪便和大分子有机物，提高饵料利用率，提高单位 水体育苗产量和成活率。这与本试验结果相符合，添加光合

细菌 10 mg/kg、乳酸菌 10 mg/kg、芽孢杆菌 10 mg/kg、海洋红酵 母10mg/kg、 光合细菌 4mg/kg+乳酸菌 1mg/kg+芽孢杆菌 4mg/ kg+海洋红酵母 1 mg/kg 的处理组的日增重分别比对照组增 加了 19.81%、19.81%、72.%、13.21%、82.08%，试验 5 组的 日增重相对于对照组最高，这说明微生态制剂对幼刺参的 生长有显著地促进作用。表明使用复合菌能一定程度上促 进幼刺参的生长和提高其存活率。 4 参考文献

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[4] 王印庚 ，荣小军，张春云，等.养殖海参主要疾病及防治技术[J].海洋 科学，2005（3）：1-7.

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[6] 于向阳 ，宋刚 ，王祝良.EM 菌在辽西刺参育苗中的应用[J].农业技术 与装备，2011（12）：25-26.

表 1 不同配方 EM 菌对刺参生长的影响 组别 取样数 量∥头 试验天 数∥d 初始平均 体重∥g 终末均体 重∥g

特定增长率 （SGR）∥% 1 #

50 60 0.792±0.157 1.554±0.293 0.012 7±0.024 0 c 2 #

50 60 0.613±0.121 1.372±0.414 0.012 7±0.048 0 c 3 #

50 60 0.756±0.123 1.856±0.496 0.018 3±0.015 0 d 4 #

50 60 0.834±0.151 1.554±0.351 0.012 0±0.026 0 b 5 #

50 60 0.717±0.154 1.877±0.562 0.019 3±0.057 0 e CK 50 60 0.673±0.197 1.313±0.447 0.010 6±0.016 0 a 注：同列不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。 （上接第 290 页）

其片段相对较小。分析其原因，可能是背景干扰 PCR 产物直 接测序，如果有必要，为保证测序结果的准确性，应当采用 克隆测序。国内关于 16S rRNA 序列分析鉴定细菌的研究已 经开展较多。张浩吉等 [5]

采用真细菌的通用引物进行 16S

rRNA 基因扩增 ，并作了克隆和测序分析 。其结果与确诊一 致，鉴定菌株为猪附红细胞体，同源性高达 99.52%。刘文华 等 [6]

在临床中对病鸭的研究表明，通过比较菌株同源性来

确定其种类，同源性高达 98.6%，验证分离菌株为链球菌。 本试验中的结果与文献报道一致，通过同源性对比，结果可 达 99.6%~99.9%。

利用 16S rRNA 恒定区序列特别保守的特点，在恒定区 设计引物，从分子水平鉴定与分类，比较及分析细菌 16S

rRNA。16S rRNA 基因约 1 500 个核苷酸 ，大小适中 ，既能利 用测序技术较容易地得到其序列，又能体现不同细菌种属 间的差异，便于序列分析。此外，近年来已经积累大量细菌 16S rRNA 基因序列数据库。应用 16S rRNA 作为研究对象 ， 采用以 PCR 为基础的多种分子生物学分析手段的联合应 用，可以克服传统的细菌检测方法存在的多种缺点，如敏感 度低、特异性差、耗时长等 [7]

。该技术结合核酸序列分析不仅

可检测与鉴定已知细菌，还可广泛用于样品中未知菌的检 测与鉴定，实现快速、微量、准确地对微生物进行检测，对微 生物菌群的组成结构进行定性甚至定量的跟踪监测。本试 验通过对 1 株从临床奶牛乳房炎分离到的细菌 16S rRNA 基因片段进行了扩增和测序，与 GenBank 上的已知序列进 行了同源性比较，同源性均>99.0%，证实试验菌为金黄色葡

萄球菌，结果证实，16S rRNA 基因在菌株鉴定中独特的优 势，具有客观、准确等优点，弥补了生化鉴定敏感性低、结果 不稳定的缺点。随着相关技术的迅速发展，可以不断提高其 测序准确性，使 16S rRNA 技术成为为细菌鉴定的常规检测 方法。进化树对了解病毒的基因型和流行病学研究均有重 要意义。通过对进化树的分析研究，可以实现对蛋白或基因 在进化过程中的演变和亲缘关系的评价。进化树可以展现 拓扑图形或者分支层次，因此可用于粗略估计不同类群生 物之间的进化关系，并反映物种之间的进化距离 [8]

。根据其

基因序列，可用进化树分析其可能的病原体来源，即使在病 原微生物未分离成功时也可实现。本试验从试验菌 16S rRNA 的进化树上看，可将 12 个菌株分为 2 个大群（Group），四川 地区流行的耐药株与日本、欧美菌株有较近的亲缘关系。此 次试验的研究结果可以为今后从基因水平上，实现金黄色 葡萄球菌的快速鉴定提供重要依据。 4 参考文献

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[4] CHENG L，ZIEGELHOFFER P R，YANG N S，et al. In vivo promoter

activity and transgene expression in mammlian somatic tissuse evaluated by using particle bombardment [J]. Proc Natl Acad Sci USA，1993（90）： 4455-4459.

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肖 潇等：基于 16S rRNA 基因序列分析的临床分离乳源菌鉴定和系统进化研究 293