(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 108719056 A(43)申请公布日 2018.11.02
(21)申请号 201810392935.7(22)申请日 2018.04.27
(71)申请人 阿勒泰地区林业工作管理站
地址 836500 维吾尔自治区阿勒泰地
区阿勒泰市南路农林巷12号(72)发明人 赵英 徐航 刘伟 郑新国 胡茵
韩晓燕 张志刚 (74)专利代理机构 北京智客联合知识产权代理
事务所(特殊普通合伙) 11700
代理人 杨群(51)Int.Cl.
A01H 4/00(2006.01)A01G 31/00(2018.01)
权利要求书1页 说明书6页
(54)发明名称
沙棘的组培育苗方法(57)摘要
本发明提供沙棘的组培育苗方法，包括以下步骤：(1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；(2)对嫩茎尖进行消毒；(3)培养条件的确定；(4)嫩茎尖的诱导；(5)嫩茎尖的增殖；(6)嫩茎尖的生根；(7)移栽：在生根培养基中诱导生根40-60天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，14-16d才能完全自然通风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±1℃，夜间15-18℃。本发明的沙棘组培育苗方法能够有效提高沙棘嫩茎尖在组培过程中的诱导率、增殖率及生根率，移栽后，成活率也达到96％以上。CN 108719056 ACN 108719056 A
权 利 要 求 书
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1.沙棘的组培育苗方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；(2)对嫩茎尖进行消毒；(3)培养条件：在对嫩茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；(4)嫩茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖，基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养；(5)嫩茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导23-27天后转入增殖培养基中进行增殖培养；
(6)嫩茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根；
(7)移栽：在生根培养基中诱导生根40-60天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，14-16d才能完全自然通风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±1℃，夜间15-18℃。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述消毒的具体方法为：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗8-12min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-2.5min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，培养温度25℃，湿度60％，光照强度2500Lx，光照时间14h/d。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)中，所述增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(6)中，所述生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(7)中，所述基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
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说 明 书沙棘的组培育苗方法
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技术领域
[0001]本发明属于通过组织培养技术的植物再生技术领域，具体涉及沙棘的组培育苗方法。
背景技术
[0002]沙棘(拉丁学名：Hippophae rhamnoides Linn.)为多年生落叶果树，灌木或小乔木。其果实、果皮、叶片、树皮及其加工制品含有280多种生理活性物质，具有强烈的消炎、杀菌、止痛和促进组织再生的特殊功效。其中许多成分在杀死和抑制肿瘤细胞、抗辐射、抗凝血、降血压、防止血管栓塞、抗衰老、抗疲劳、增强机体活力和免疫力等方面都显示出神奇的治疗效果。
[0003]沙棘枝叶茂盛、侧根发达、根蘖性极强，能迅速串根自蘖形成密集的群体，并能与放线菌、细菌、分枝杆菌等共生形成大量根瘤，具有比大豆更强的固氮能力(每公顷可固氮180kg)。此外，具有生长迅速，耐干旱，耐盐碱瘠薄，御严寒酷暑，具有保持水土、防风固沙、改良土壤和适应性强等促进生态平衡的明显作用，不仅是干旱风沙地区造林绿化的先锋树种，也是重要的薪炭林和饲料林树种。所以，在当前的退耕还林、农林产业结构调整中，种植沙棘具有重要的营养价值、生态价值和经济价值。[0004]沙棘雌雄异株，靠种子繁殖在生产上难以保持优良品种的特性；根蘖繁殖繁殖系数较低。目前生产上采用的扦插繁殖成活率也不高，还容易传播病害。利用组织培养方法工厂化的繁育种苗不仅能大大提高繁殖系数，还可以建立离体无性种质资源库，替代占用大量土地面积的资源圃。
发明内容
[0005]为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了沙棘的组培育苗方法。[0006]本发明提供沙棘的组培育苗方法，包括以下步骤：[0007](1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；[0008](2)对嫩茎尖进行消毒；[0009](3)培养条件：在对嫩茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d；[0010](4)嫩茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖，基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养；[0011](5)嫩茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导23-27天后转入增殖培养基中进行增殖培养；[0012](6)嫩茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根；[0013](7)移栽：在生根培养基中诱导生根40-60天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，14-16d才能完全自然通
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说 明 书
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风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±1℃，夜间15-18℃。[0014]作为优选，步骤(2)中，所述消毒的具体方法为：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗8-12min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-2.5min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次。
[0015]作为优选，步骤(3)中，培养温度25℃，湿度60％，光照强度2500Lx，光照时间14h/d。
[0016]作为优选，步骤(4)中，所述诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0017]作为优选，步骤(4)中，所述诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
[0018]作为优选，步骤(5)中，所述增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
[0019]作为优选，步骤(6)中，所述生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
[0020]作为优选，步骤(7)中，所述基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
[0021]本发明的沙棘组培育苗方法能够有效提高沙棘嫩茎尖在组培过程中的诱导率、增殖率及生根率，移栽后，成活率也达到96％以上。具体实施方式
[0022]以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
[0023]在本发明中，1/2MS和1/2B5均为本领域技术人员知晓的公知常识，其为大量元素减半的MS培养基和B5培养基。MS培养基和B5培养基同样为本领域技术人员知晓的公知常识。
[0024]本发明的沙棘的组培育苗方法包括以下步骤：[0025](1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。[0026](2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗8-12min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-2.5min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次。用酒精的话，褐化会非常严重，而用上述消毒方法，则褐化率在1％以内。[0027](3)培养条件：在茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d。[0028](4)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成0.5cm-1.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养。[0029]诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0030]本申请人对沙棘的多个品种进行试验，比如雄株、QX-0601、QX-0104、QX-0102、QX-4
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0105等，发现，相比于使用1/2MS培养基作为基础培养基，使用本申请的诱导培养基诱导率高，在91％-99％之间。[0031](5)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导23-27天后转入增殖培养基中进行增殖培养，一般25-30天继代一次。[0032]增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0033]本申请人对沙棘的多个品种进行试验，比如雄株、QX-0601、QX-0103、辽阜、QX-0102、QX-0105等，发现，相比于使用1/2MS培养基或MS培养基作为基础培养基，使用本申请的增殖培养基时，上述品种的增殖率均大幅度提高，在87-98％之间，且长势很好。[0034](6)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根。
[0035]生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0036]本申请人对沙棘的多个品种进行试验，比如雄株、QX-0601、QX-0103和辽阜等，发现，雄株和QX-0601的生根率高，为90-95％，而QX-0103和辽阜的生根率在70-80％之间。[0037](7)移栽：在生根培养基中诱导生根40-60天后成苗移栽，此时，根到3.5-4.5cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
[0038]移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，15d左右才能完全揭开帘子，进行自然通风。同时要控制好温度，白天温度应控制在25±1℃，夜间15-18℃。[0039]试管苗移栽20d后，成活率可达96％以上。[0040]实施例1
[0041]本发明的沙棘的组培育苗方法包括以下步骤：[0042](1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。[0043](2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗10min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6次。褐化率为1％。[0044](3)培养条件：在茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度25℃，湿度60％，光照强度2500Lx，光照时间14h/d。[0045](4)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成1cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养。[0046]诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0047]沙棘品种为雄株时，诱导率为95％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为97％；沙棘品种为QX-0104时，诱导率为93％；沙棘品种为QX-0102时，诱导率为96％；沙棘品种为QX-0105时，诱导率为99％。[0048](5)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导25天后转入增殖培养基中进行增殖培养，28天继代一次。[0049]增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0050]沙棘品种为雄株时，增殖率为93％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为97％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为96％；沙棘品种为辽阜时，增殖率为92％；沙棘品种为QX-0102时，
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增殖率为94％；沙棘品种为QX-0105时，增殖率为98％。[0051](6)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根。
[0052]生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0053]沙棘品种为雄株时，生根率为93％；沙棘品种为QX-0601时，生根率为95％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为76％；沙棘品种为辽阜时，生根率为80％。[0054](7)移栽：在生根培养基中诱导生根50天后成苗移栽，此时，根到3.5-4.5cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
[0055]移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，15d才能完全揭开帘子。同时要控制好温度，白天温度应控制在25℃，夜间15-18℃。[0056]试管苗移栽20d后，成活率可达98％。[0057]实施例2
[0058]本发明的沙棘的组培育苗方法包括以下步骤：[0059](1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。[0060](2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗12min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6次。褐化率为1％。[0061](3)培养条件：在茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度24℃，湿度50％，光照强度3000Lx，光照时间13h/d。[0062](4)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成1.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养。[0063]诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[00]沙棘品种为雄株时，诱导率为93％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为95％；沙棘品种为QX-0104时，诱导率为92％；沙棘品种为QX-0102时，诱导率为91％；沙棘品种为QX-0105时，诱导率为97％。[0065](5)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导23天后转入增殖培养基中进行增殖培养，25天继代一次。[0066]增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0067]沙棘品种为雄株时，增殖率为90％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为94％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为93％；沙棘品种为辽阜时，增殖率为87％；沙棘品种为QX-0102时，增殖率为％；沙棘品种为QX-0105时，增殖率为92％。[0068](6)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根。
[0069]生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0070]沙棘品种为雄株时，生根率为90％；沙棘品种为QX-0601时，生根率为93％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为72％；沙棘品种为辽阜时，生根率为77％。[0071](7)移栽：在生根培养基中诱导生根60天后成苗移栽，此时，根到3.5-4.5cm，
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将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
[0072]移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，16d才能完全揭开帘子。同时要控制好温度，白天温度应控制在24℃，夜间15-18℃。[0073]试管苗移栽20d后，成活率可达96％。[0074]实施例3
[0075]本发明的沙棘的组培育苗方法包括以下步骤：[0076](1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。[0077](2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗8min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2.5min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗7次。褐化率为1％。[0078](3)培养条件：在茎尖的诱导、增殖和生根过程中，培养温度26℃，湿度70％，光照强度2000Lx，光照时间16h/d。[0079](4)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成0.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养。[0080]诱导培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0081]沙棘品种为雄株时，诱导率为92％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为96％；沙棘品种为QX-0104时，诱导率为91％；沙棘品种为QX-0102时，诱导率为92％；沙棘品种为QX-0105时，诱导率为98％。[0082](5)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导27天后转入增殖培养基中进行增殖培养，30天继代一次。[0083]增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0084]沙棘品种为雄株时，增殖率为％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为95％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为91％；沙棘品种为辽阜时，增殖率为90％；沙棘品种为QX-0102时，增殖率为91％；沙棘品种为QX-0105时，增殖率为94％。[0085](6)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根。
[0086]生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。[0087]沙棘品种为雄株时，生根率为91％；沙棘品种为QX-0601时，生根率为94％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为70％；沙棘品种为辽阜时，生根率为73％。[0088](7)移栽：在生根培养基中诱导生根40天后成苗移栽，此时，根到3.5-4.5cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土和珍珠岩混合制备而成，两者的体积比为1:1。
[00]移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，14d才能完全揭开帘子。同时要控制好温度，白天温度应控制在26℃，夜间15-18℃。[0090]试管苗移栽20d后，成活率可达96％。[0091]最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于本发明，
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尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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