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Transwell实验步骤

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Transwell实验步骤:

1. matrigel解冻,4°解冻。(注意:matrigel很容易凝固,时刻放冰上)

2. 按无血清培养基:matrigel=7:1的比例混匀作为胶层(每个小室加50ul)

3. 用ep管混匀后以50ul每孔加入到小室中(从小室中间滴加进去铺的更均匀),于37°放置30min左右

4. 配置上下层工作液,上层(即小室中)200ul,下层500ul。(上层为细胞层,以无血清培养基配细胞液;下层为10%血清培养基。上下层都应加药)注:细胞处理中在离心后需用pbs洗一遍,后用无血清培养基重悬计数。

5. 待matrigel凝固后,取出并吸去上清没有凝固的培养基,注意不要碰坏胶层。

6. 将下层工作液加入下层24孔板中,放入小室,注意中间不要有气泡,加入上层工作液,完成。

7. 放置20h左右后取出(各细胞各异),吸去上层并用棉签轻轻擦拭除去上层细胞,剪下小室底膜置于孔板中或载玻片上(底面朝上放置),加pbs洗一遍,吸去,加入快速瑞姬氏染料,吸去,用pbs清洗,吸去。

8. 观察(也可以在观察前用中性树胶固定)

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