消化外科 2004年第3卷第3期211-214
JournalofDigestiveSurgery,2004,3(3):211-214
・211・
文章编号:1671-4555(2004)03-0211-04
・实验研究・胃癌中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达及其意义
谷化平1 周翠玲2 尚培中3
【摘要】 目的 探讨CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达与胃癌临床病理学行为和患者预后的关系。方法 应用免疫组化技术检测120例胃癌组织中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达,并结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料分析。结果 在胃癌组织中,CD44v6、P53和nm23H1表达阳性率分别为8117%、6813%和4813%。CD44v6和P53高表达和nm23H1低表达均与胃癌浆膜浸润、淋巴结转移和患者预后呈正相关(P<0.05)。结论 CD44v6、P53和nm23H1表达与胃癌转移和患者生存期密切相关,检测CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达可作为判断胃癌预后的参考指标。 【关键词】 胃肿瘤 腺癌 肿瘤转移 基因表达 免疫组织化学 【中图法分类号】 R735.2 【文献标识码】 A
ExpressionandsignificanceofCD44v6,P53andnm23H1ingastriccarcinoma GuHuaping,ZhouCuil2ing,ShangPeizhong.DepartmentofPathology,The251stHospitalofPLA,Zhangjiakou075000
【Abstract】 Objective TostudytheexpressionofcelladhesionmolecularCD44v6,P53andnm23H1geneproteiningastriccarcinoma(SGC)andtheirrelationshipwiththepathologicalbehaviorandprognosis.Meth2ods ImmunohistochemicalstaininghasusedtodetecttheexpressionofCD44v6,P53andnm23H1geneproteinin120casesofSGC.Thestudywasalsocombinedwithanalysisofthepathologicalbehaviorandclinicalfollow2upsurveyofSGC.Results ThepositiveexpressionrateofCD44v6andCD44v6,P53andnm23H1proteininSGCwere81.7%,68.3%and48.3%,respectively.ThehighlevelexpressionofCD44v6andP53thelowexpressionofnm23H1werepositivelycorrelatedwiththestageoflymphnodemetastasisandtheprognosisofpatients(P<0.05).Conclusions ThesedatashowedtheexpressionofCD44v6,P53andnm23H1proteinwascloselyrelationtothepotentialofmetastasisandsurvivalrateinSGC.CD44v6,P53andnm23H1proteinmaybeprognosticindi2catorsinSGC. 【Keywords】 stomachneoplasms adenocarcinoma metastasis geneexpression
immunohistochemistry
细胞粘附分子CD44v6异常表达、P53抑癌基因突变及肿瘤转移抑制基因nm23H1失活均与许多肿瘤的侵袭转移及预后相关1～8。我们应用免疫组织化学方法,对胃癌组织进行CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白联合检测,并结合临床随访资料
1 材料与方法1.1 标本
取第251医院普外科1992年2月至2004年3月确诊为胃癌标本存档蜡块120例,男80例,女40例。发病年龄15～78岁,平均5817岁。肿瘤大小:≤4cm39例,>4cm81例。临床病理分期:早期胃癌21例,进展期胃癌99例。120例胃癌标本中,获得术后满5年随访者
81例,其中死亡病例60例(进展期胃癌58例,早期胃癌2
分析,探讨其表达与胃癌组织侵袭转移和患者预后的关系及3种基因蛋白表达的相关性,旨在为判断胃癌生物学行为和评估患者预后提供参考指标。
作者单位:1 075000河北张家口第251医院病理科;2 河北北方学院第一附属医院普外科;3 第251医院院普外科
例),尚生存病例21例(进展期胃癌2例,早期胃癌19例)。取同期胃癌癌旁不典型增生组织30例(Ⅰ级12例、Ⅱ级15例、Ⅲ级3例)和正常胃粘膜组织(胃镜标本)各作
m厚连为对照。标本经10%固定,石蜡包埋,4μ
续切片。
・212・谷化平,等.胃癌中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达及其意义
1.2 试剂
鼠抗CD44v6、P53(Do27)、nm23H1单克隆抗体和LSAB试剂盒均为丹麦Dako公司产品。
1.3 免疫组织化学染色
采用微波2LSAB法。即切片常规脱蜡水化后,放入
PBS(枸橼酸缓冲液,10mmol/L,pH6.0)内,用YWY781A型医用微波仪170W辐射处理5min,冷却后水洗。其它操作流程同常规LSAB法,所不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用微波仪130W各辐射处理5min、保温2min即可。H2O22DAB显色。实验用已知CD44v6、P53和nm23H1阳性大肠癌组织作阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判断
CD44v6和nm23H1以细胞质和细胞膜显示棕黄色颗粒、P53以细胞核显示棕黄色颗粒为阳性。将3种基因蛋白表达状况分为4级:未见棕黄色颗粒为阴性(-),阳性细胞数<25%为弱阳性(+),25%～75%为阳性(6),>75%为强阳性(7)。
1.5 统计学处理
采用四格表χ2检验。
2 结果
2.1 3种基因蛋白在正常胃粘膜和良恶性病变
中的表达
免疫组织化学染色显示,CD44v6呈细胞质和细胞膜阳性(图1),P53呈细胞核阳性(图2)、nm23H1呈细胞质阳性(图3)。30例正常胃粘膜组织中未见CD44v6和P53阳性反应,23例(76.7%)呈nm23H1阳性反应。30例癌旁不典型增生组织中,4例(6.70%)呈CD44v6阳性表达,5例(1617%)呈P53阳性表达,25例((8313%)呈nm23H1阳性表达。120例胃癌中,CD44v6、P53和nm23H1表达阳性分别为98例(8117%)、82例(6813%)和58例(4813%)。在胃癌中CD44v6和P53阳性表达率显著高于癌旁不典型增
生组织(χ2=48.41χ,2=26.30,P<0.005),nm23H1阳性
表达率显著低于癌旁不典型增生组织(
χ2
=11.90,P<0.05),见表1。
2.2 3种基因蛋白表达与胃癌临床病理指标的
关系
CD44v6、P53和nm23H1蛋白表达均与胃癌患者性别和肿瘤大小无关,而随着胃癌的进展、浆膜浸润和淋巴结转移,CD44v6和P53蛋白阳性表达率增高,nm23H1阳性
表达率减低,差异均有显著性意义(P<0.05),见表2。
2.3 3种基因蛋白表达与胃癌患者预后的关系
120例胃癌标本中,获得满5年以上随访的胃癌标本
81例,其中CD44v6、P53和nm23H1蛋白阳性表达分别为69例(85.2%)、54例(66.7%)和38例(46.9%)。CD44v6、P53蛋白的高表达和nm23H1蛋白低表达均与患者预后呈
正相关(P<0.05),见表3。
2.4 CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达之间
的相关性
在CD44v6阳性表达的98例胃癌中P53和nm23H1阳
性表达分别为73例(74.5%)和41例(41.8%),在CD44v6阴性表达的22例胃癌中P53和nm23H1阳性表达分别为9例(40.9%)和17例(77.3%)。CD44v6阳性表达与P53阳性
表达密切相关(χ2=9.36,P<0.05)呈正相关,与nm23H1
阴性表达呈负相关χ(2
=9.03,P<0.05)。
图1 胃癌细胞质和细胞膜CD44v6基因蛋白免疫
组织化学染色阳性(微波2LSAB法×100)
图2 胃癌细胞核P53基因蛋白免疫组织化学
染色阳性(微波2LSAB法×200)
图3 胃癌细胞质nm23H1基因蛋白免疫组织
化学染色阳性(微波2LSAB法×200)
谷化平,等.胃癌中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达及其意义
表1 3种基因蛋白在正常胃粘膜和良恶性病变中的表达
组 别正常胃粘膜不典型增生胃癌
n
・213・
CD44v6表达
-302622
+0225
P53表达nm23H1表达
6
0238
7
0035
阳性(%) 0 4(6.7) 98(81.7)
-302538
+0314
6
0232
7
0036
阳性(%)
05(16.7)82(68.3)
-7562
+5719
6
8721
7
101118
阳性(%)
23(76.7)25(83.3)58(48.3)
3030120
表2 3种基因蛋白表达与胃癌临床病理指标的关系
临床病理特征n性别 男 女肿瘤大小 ≤4cm >4cm临床病理分期 早期胃癌
21
9
520
533
233
12(57.1)86(86.9)
10.21
<0.05
1226
212
329
432
9(42.9)73(73.7)
7.63
<0.05
557
316
912
711
16(76.2)42(42.4)
7.91
<0.05
39108112
1015
1028
926
29(74.4)69(85.2)
2.06
>0.05
1622
68
725
1026
23(59.0)59(72.8)
2.34
>0.05
2438
514
417
612
15(38.5)43(53.1)
2.25
>0.05
CD44v6表达
-+178
P53表达
2χ
nm23H1表达
2χ
6308
7287
阳性(%)75(84.3)23(74.2)
P-25
+95
6266
7297
阳性(%)(71.9)18(58.1)
P-42
+154
6174
7153
阳性(%)47(52.8)11(35.5)
2χ
P
1431
8
1.56>0.05
13
2.04>0.05
20
2.76>0.05
进展期胃癌9913浆膜浸润 无 有淋巴结转移 无 有
34128610671953
3
1213
2315
1322
48(71.4)50(94.3)
8.72
<0.05
2810
86
1616
1521
39(58.2)43(81.1)
7.19
<0.05
2735
154
156
108
40(59.7)18(34.0)
7.85
<0.05
520
1622
728
22(.7)76(88.4)
9.12
<0.05
1919
410
527
630
15(44.1)67(69.8)
12.86
<0.05
953
910
813
810
25(73.5)33(38.4)
12.06
<0.05
表3 3种基因蛋白表达与胃癌患者预后的关系
组别生存组死亡组
n
CD44v6表达
-75
+413
P53表达
2χ
nm23H1表达
2χ
6520
7522
阳性(%)14(66.7)55(91.7)
P-14
+112
6216
7419
阳性(%)7(33.3)47(78.3)
P-5
+28
9
7105
阳性(%)16(76.2)22(36.7)
2χ
P
2160
7.70<0.05
13
14.18<0.05
38
9.76<0.05
3 讨论
维持细胞的正常生长,抑制恶性增殖,启动细胞的程序性死亡的发生而起抑癌作用。当P53基因与肿瘤病毒蛋白质结合,或通过突变、丢失、重排等形式而失活,使DNA损伤不能被修复,细胞遗传不稳定,并向恶性转变。已研究证实,突变型P53蛋白表达与多种恶性肿瘤的发生、发展、浸润、转移及预后相关4～6。nm23H1基因位于染色体17q1/1322,包含5个外显子和4个内含子,编码核
CD44是位于人类第11号染色体短臂上的基因所编码的细胞粘附分子,为整合膜糖蛋白。CD44v6是CD44的一种拼接变异体,其表达可有
助于肿瘤细胞获得转移潜能。CD44v6的促进转移作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一配体结合,使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长,由此形成转移瘤。近年来发现,CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关1～3。P53基因是人类肿瘤研究中较为重要的肿瘤抑制基因,定位于染色体17P11.1上,编码一个由393个氨基酸组成的核磷蛋白。P53基因能
苷二磷酸激酶(NDPK),其参加机体内多种生物学
过程,包括三磷酸核苷(除外ATP)的合成,G蛋白介导的信号传递过程,细胞骨架微管的聚合和解聚以及纺缍体的形成等。nm23表达降低与肿瘤的淋巴结转移、高复发率及低生存相关,低nm23表达强烈提示预后不佳。对nm23H1mRNA和蛋
・214・谷化平,等.胃癌中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达及其意义
参考文献
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cellulardifferentiationbutnotwithprognosisinhumanbreastcancerJ.CancerRes,1995,55(3):544-5473
白表达研究表明,在人类多种肿瘤如大肠癌和乳腺癌等中,nm23H1mRNA或蛋白的表达与肿瘤转移及临床预后不良呈负相关7,8。我们采用免疫组织化学技术,检测了120例胃癌组织中CD44v6、P53和nm23H1基因蛋白表达状况。结果
显示,在胃癌组织中,CD44v6和P53阳性表达率显著高于正常胃粘膜和癌旁不典型增生组织,nm23H1阳性表达率显著低于正常胃粘膜和癌旁
不典型增生组织。CD44v6和P53蛋白的高表达水平和nm23H1蛋白低表达水平均在进展期胃癌
中显著高于早期胃癌(P<0.05),伴浆膜浸润和淋巴结转移的胃癌显著高于无浆膜浸润和无淋巴结转移的胃癌(P<0.05)。结果表明,CD44v6、P53和nm23H1表达不仅参与胃粘膜上皮细胞的恶性转化过程,而且在预测原发胃癌肿瘤的转移潜能方面具有较大实用价值。本研究还发现,在满5年随访的胃癌标本中,死亡病例中的CD44v6和P53蛋白阳性表达和nm23H1蛋白阴性表达均显
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著高于生存病例(P<0.05),提示CD44v6、P53和nm23H1蛋白的表达与胃癌患者的预后密切相关,是一个预测胃癌患者预后不良的重要生物学指标。
有关胃癌的CD44v6、P53和nm23H1蛋白免疫组织化学对比研究文献报道甚少。我们研究发现,在胃癌组织中CD44v6与P53蛋白表达之间的一致性,以及CD44v6表达与nm23H1表达之间的负相关性,提示CD44v6、P53和nm23H1在胃癌的发生、细胞增殖、侵袭和转移的病理过程中具有相互协同作用的可能作用。其机理有待进一步研究。(上接206页)
段的长短、横结肠前、后的位置及固定于残胃上的位置高低有关。内疝是因为小肠通过胃肠吻合口后所遗留的人为的空肠系膜后间隙所致,唯有关闭此间隙方可加以防止。此病例造成输出段远端小肠内疝扭转除因间隙未闭外可能与剧烈运动有关。而内疝扭转造成输出段远端小肠闭袢性肠梗阻,张力大,导致肠壁血运障碍,极易引起肠坏死穿孔。
我院的经验是胃溃疡多选用BillrothⅠ式胃大部切除
谷化平,刘艳茹,尚培中.nm23H1和E2cadherin基因蛋白在胆囊癌组织中的表达J.中国现代普通外科进展杂志,2002,5(1):29-31
(收稿日期:2004-02-05) 本文编辑:沈锡庚
术,十二指肠球部溃疡选用BillrothⅡ式胃大部切除术,结肠后吻合,有手术并发症时才选用Roux2en2Y型胃空肠吻合术,但一定要缝合关闭空肠系膜后间隙。 【关键词】 胃溃疡 Roux-Y胃空肠吻合术
闭袢性梗阻
【中图法分类号】 R656.62 【文献标识码】 B (收稿日期:2004-03-12) 本文编辑:沈锡庚