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链霉菌基因组DNA提取

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链霉菌基因组DNA提取

1. 刮取孢子接种于TSB中,培养菌体4-5d,吸取2ml的菌液于2.0ml离心管中,3000rpm离心15min收集菌体;

2. 加入ddH2O洗涤菌体两次;

3. 用500μl溶菌酶溶液(加RNaseA)重新悬浮菌丝体,于37℃温育约50min至细胞成为半透明状(中途取出涡旋混匀几次);

4. 加入500μl 2%SDS,混合振荡约lmin直到溶液的粘度显著下降,打开盖子,于55℃温育30min;

5. 冷却至室温,然后加入1/10体积3M醋酸钠和200μl氯仿/异戊醇(24:1),涡旋振荡约1min后,4℃ 12000rpm离心5min;

6. 小心地吸取上清液,弃去白色中间层。(不要吸到中间白色物质),用氯仿/异戊醇(24:1)重复二次抽提直至看不见(或非常少)中间层为止;

7. 取上清,加入预冷的2倍体积的无水乙醇,反复颠倒,-20℃放置30min.置絮状DNA沉淀出现;

8. 离心倾去上清液,DNA沉淀块分别经70%乙醇洗涤,用头吸去液体,晾干数分钟;

9. 后溶解在适量的ddH2O中,用分光光度计测浓度及纯度后,-20℃保存。

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